استخراج DNA RNA؛ علت Ct بالا در PCR استخراج DNA RNA یکی از مهمترین مراحل در تشخیص مولکولی و آزمایشهای PCR و Real-Time PCR است. در بسیاری از آزمایشگاهها، زمانی که Ct بالا گزارش میشود یا نتیجه آزمایش پایدار نیست، تمرکز معمولاً روی کیت PCR یا دستگاه قرار میگیرد؛ در حالی که تجربه عملی نشان […]
استخراج DNA RNA؛ علت Ct بالا در PCR
آزمایشهای PCR و Real-Time PCR است. در بسیاری از آزمایشگاهها،
زمانی که Ct بالا گزارش میشود یا نتیجه آزمایش پایدار نیست،
تمرکز معمولاً روی کیت PCR یا دستگاه قرار میگیرد؛
در حالی که تجربه عملی نشان میدهد
استخراج نامناسب DNA یا RNA
در بخش بزرگی از این موارد عامل اصلی است.
استخراج DNA RNA چیست؟
استخراج DNA RNA فرآیندی است که طی آن اسید نوکلئیک از نمونههای بالینی
مانند خون، سواب، بزاق، سرم یا بافت جدا میشود.
هدف این مرحله دستیابی به DNA یا RNA
خالص، پایدار و عاری از مهارکنندههاست
تا واکنش PCR با بیشترین دقت انجام شود.
چرا استخراج DNA RNA ضعیف باعث Ct بالا میشود؟
در صورت استخراج نامناسب، موادی مانند هموگلوبین،
نمکها، الکل باقیمانده و پروتئینها
در نمونه باقی میمانند.
این ترکیبات بهعنوان مهارکننده PCR عمل کرده
و باعث افزایش Ct، کاهش حساسیت
و در مواردی false negative میشوند.
نشانههای استخراج DNA RNA نامناسب
- افزایش غیرطبیعی Ct در PCR
- تفاوت Ct بین تکرارهای یک نمونه
- نتیجه منفی کاذب در نمونههای با غلظت پایین
- نیاز به تکرار تست و مصرف بیشتر کیتها
نقش کیت استخراج در کیفیت PCR
انتخاب کیت مناسب برای استخراج DNA RNA
نقش تعیینکنندهای در کیفیت نهایی PCR دارد.
کیتهای استخراج با طراحی بهینه میتوانند
مهارکنندهها را بهتر حذف کرده
و ورودی استانداردی برای واکنش PCR فراهم کنند.
در محصولات Biotech Rabbit،
کیتهای استخراج زیر برای کاربردهای مختلف طراحی شدهاند:
GenUP™ Virus DNA/RNA Kit
– مناسب استخراج DNA و RNA ویروسی از نمونههای بالینی
GenUP™ Total RNA Kit
– مناسب استخراج RNA با کیفیت بالا از انواع نمونه
GenUP™ Blood RNA Kit
– طراحیشده برای نمونههای خونی با مهارکنندههای بالا
ارتباط استخراج DNA RNA و Master Mix
حتی بهترین Master Mix نیز در صورت استفاده از DNA یا RNA
با کیفیت پایین نمیتواند نتیجه قابلاعتماد تولید کند.
به همین دلیل هماهنگی بین کیت استخراج و Master Mix
در تشخیص مولکولی اهمیت زیادی دارد.
در کنار کیتهای استخراج،
Master Mixهای زیر در بسیاری از آزمایشگاهها استفاده میشوند:
4X CAPITAL™ qPCR Probe Master Mix
4X CAPITAL™ 1-Step qRT-PCR Probe Master Mix
2X YourTaq™ PCR Master Mix
نماینده انحصاری Biotech Rabbit در ایران
شرکت فرداد آزما راد
بهعنوان نماینده انحصاری محصولات Biotech Rabbit در ایران،
مجموعهای از کیتهای استخراج DNA RNA
و Master Mixهای PCR و Real-Time PCR
را همراه با پشتیبانی علمی و فنی
در اختیار آزمایشگاهها قرار میدهد.
جمعبندی
استخراج DNA RNA نقطه شروع تشخیص مولکولی است.
اگر این مرحله بهدرستی انجام نشود،
Ct بالا و نتایج غیرقابلاعتماد در PCR اجتنابناپذیر خواهد بود.
انتخاب کیت استخراج مناسب،
کلید دستیابی به تشخیص دقیق و پایدار است.
